重組人胰島素前體的酶切轉(zhuǎn)換方法
基本信息
| 申請(qǐng)?zhí)?/td> | CN202011607271.5 | 申請(qǐng)日 | - |
| 公開(kāi)（公告）號(hào) | CN112625116A | 公開(kāi)（公告）日 | 2021-04-09 |
| 申請(qǐng)公布號(hào) | CN112625116A | 申請(qǐng)公布日 | 2021-04-09 |
| 分類(lèi)號(hào) | C07K14/62;C12P21/06 | 分類(lèi) | 有機(jī)化學(xué)〔2〕; |
| 發(fā)明人 | 聶洪霞;劉海峰;黃菁;許波;呂曉林;張金迪;解福生;郝向慧 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 | 華潤(rùn)生物醫(yī)藥（北京）有限公司 |
| 代理機(jī)構(gòu) | 北京思元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） | 代理人 | 余光軍;霍雪梅 |
| 地址 | 252201 山東省聊城市東阿縣阿膠街78號(hào) | ||
| 法律狀態(tài) | - | ||
摘要
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)了重組人胰島素前體的酶切轉(zhuǎn)換方法，包括：(1)將初步純化的重組人胰島素前體溶液加入緩沖液進(jìn)行濃度和pH值的調(diào)整得到酶切反應(yīng)底物混合液；(2)向酶切反應(yīng)底物混合液中加入重組賴氨酰肽內(nèi)切酶進(jìn)行重組人胰島素前體的酶切轉(zhuǎn)換反應(yīng)。本發(fā)明選擇重組賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶作為工具酶，與常用的重組胰蛋白酶相比，單位前體蛋白所需的酶更少，酶切位點(diǎn)單一，酶切過(guò)程更高效，使人胰島素前體的酶切轉(zhuǎn)換效率達(dá)到95％以上；在放大酶切時(shí)，沒(méi)有過(guò)酶切的顧慮且酶切后獲得的目的蛋白純度更高；重組賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶酶切最適pH范圍離酶切前后蛋白的pI更遠(yuǎn)，有利于目的蛋白的穩(wěn)定且對(duì)酶切環(huán)境中的鹽濃度耐受范圍更大。 |
