一種載脂蛋白-J的制備方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN200710007353.4 申請日 -
公開（公告）號 CN101082045B 公開（公告）日 2010-12-08
申請公布號 CN101082045B 申請公布日 2010-12-08
分類號 C12N15/09(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C07K14/435(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 耿永健 申請（專利權(quán)）人 廈門德馨尚品醫(yī)療科技有限公司
代理機構(gòu) 上海浦一知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 丁紀(jì)鐵
地址 美國得克薩斯州
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種載脂蛋白-J的制備方法，其特征在于：a、采用RT-PCR技術(shù)從RNA克隆并擴增出載脂蛋白-J的全長或部分片段的互補脫氧核糖核酸cDNA；b、利用DNA重組技術(shù)將載脂蛋白-J cDNA全長或部分片段插入到一個質(zhì)粒構(gòu)成原核或真核細(xì)胞表達(dá)載體并連接6個組氨酸尾6HisTa；c、將此載脂蛋白-J原核表達(dá)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染大腸桿菌，在抗菌素選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)此轉(zhuǎn)染的細(xì)菌以擴增載脂蛋白-J表達(dá)質(zhì)粒；d、收集轉(zhuǎn)染的菌體，離心沉淀，裂解釋放載脂蛋白-J；e、將此載脂蛋白-J真核表達(dá)質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染哺乳動物細(xì)胞；f、用Ni-NTA樹脂從細(xì)菌中抽提或細(xì)胞培養(yǎng)基上清含有連續(xù)6個組氨酸尾6HisTag的具有天然結(jié)構(gòu)的可溶性重組載脂蛋白-J；g、用親和層析方法純化；h、對純化載脂蛋白-J生物活性鑒定及檢測。