一種基于CRISPR-Cas9技術(shù)的miR-126全長基因敲除試劑盒及其應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201611002317.4 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN106566838B 公開（公告）日 2019-11-01
申請(qǐng)公布號(hào) CN106566838B 申請(qǐng)公布日 2019-11-01
分類號(hào) C12N15/63（2006.01）I; C12N15/113（2010.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 徐曉晶; 趙瑩; 孫冰玉; 姚琴琴; 陸凌佳 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 上海伯豪生物技術(shù)有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海市匯業(yè)律師事務(wù)所 代理人 上海伯豪生物技術(shù)有限公司
地址 201203 上海市浦東新區(qū)張江高科技園區(qū)李冰路151號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種基于CRISPR?Cas9技術(shù)的miR?126全長基因敲除試劑盒及其應(yīng)用。本發(fā)明優(yōu)選miR?126基因上下游CRISPR?Cas9靶標(biāo)序列，設(shè)計(jì)合成針對(duì)該靶標(biāo)序列的sgRNA單鏈，并構(gòu)建到載體中，通過轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞株，sgRNA與trRNA構(gòu)成特異識(shí)別結(jié)構(gòu)，從而引導(dǎo)Cas9酶特異剪切miR?126基因兩端對(duì)應(yīng)序列，持續(xù)藥篩得到miR?126全長基因敲除細(xì)胞株；經(jīng)對(duì)藥篩細(xì)胞株測序驗(yàn)證，得到優(yōu)選的上下游sgRNA組合，該組合的敲除效率高達(dá)90％以上，以此構(gòu)建試劑盒，可對(duì)293T、肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549以及血管內(nèi)皮細(xì)胞HUVEC系等多種類型細(xì)胞系進(jìn)行特異性的miR?126全長基因敲除。