用于基因定點(diǎn)修飾的TALE重復(fù)片段的高效合成方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201210380206.2 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN102864158B 公開(kāi)（公告）日 2014-04-23
申請(qǐng)公布號(hào) CN102864158B 申請(qǐng)公布日 2014-04-23
分類(lèi)號(hào) C12N15/31(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I;C12R1/64(2006.01)N 分類(lèi) 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 魏文勝;楊君嬌;袁鵬飛 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 廣州輯因醫(yī)療科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 王朋飛;張慶敏
地址 100871 北京市海淀區(qū)頤和園路5號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種TALE重復(fù)片段的合成方法。本發(fā)明通過(guò)對(duì)用于PCR擴(kuò)增的DNA模板以及引物的設(shè)計(jì)，使用尿嘧啶脫氧核糖核苷酸切除法用尿嘧啶切除試劑（uracil-specific?excision?reagent：USER）制造DNA片段兩端的粘性末端，將含單個(gè)、二個(gè)或三個(gè)TALE重復(fù)單位的多個(gè)DNA片段按正確順序連接進(jìn)載體，獲得能表達(dá)特異性結(jié)合靶基因的TALE蛋白的重組載體，并利用重組載體在細(xì)胞中完成靶基因敲除、敲入或過(guò)表達(dá)、抑制表達(dá)。本發(fā)明方法省時(shí)、簡(jiǎn)便、正確率高，能夠?qū)崿F(xiàn)高通量、自動(dòng)化需求。