一種重組變構(gòu)膠原酶的制備方法及其應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201810851432.1 申請日 -
公開（公告）號 CN108949730A 公開（公告）日 2018-12-07
申請公布號 CN108949730A 申請公布日 2018-12-07
分類號 C12N9/52;A61K38/48;A61P3/04;A61P17/02;A61P35/00;A61K8/66;A61Q19/00;A23L33/195 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 倉勇;張震;杜剛;陳福鼎 申請（專利權(quán)）人 科笛生物醫(yī)藥（上海）有限公司
代理機構(gòu) 北京天奇智新知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 李振文
地址 200131 上海市浦東新區(qū)中國（上海）自由貿(mào)易試驗區(qū)環(huán)科路999弄17號205室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及重組變構(gòu)膠原酶的純化方法及其應(yīng)用，公開了一種制備高純度單一突變體膠原蛋白酶ColH的方法和所獲得的產(chǎn)品。所述制備高純度單一突變體膠原蛋白酶ColH的方法包括采用特定宿主菌BL21(DE3)表達E451D單點突變ColH變構(gòu)膠原酶蛋白，經(jīng)低溫菌種發(fā)酵誘導(dǎo)后，提高目的蛋白產(chǎn)量。通過五步純化：Capto Phenyl HS疏水層析；Capto Q陰離子交換層析；CaptoOctyl疏水層析；Phenyl HP疏水層析；Source 15Q陰離子交換層析后，獲得了純度98％以上的目的蛋白。生物學(xué)實驗結(jié)果表明，此工藝生產(chǎn)的突變膠原蛋白酶純度高，穩(wěn)定性好，與之前的膠原蛋白酶商品相比具有明顯的優(yōu)勢，酶比活顯著提高。