一種RSK4酶活性的快速檢測(cè)方法及其應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201910486214.7 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN110172495A 公開（公告）日 2019-08-27
申請(qǐng)公布號(hào) CN110172495A 申請(qǐng)公布日 2019-08-27
分類號(hào) C12Q1/48 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 石榴;徐燕華 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 武漢合研生物醫(yī)藥科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 馮子玲
地址 430000 湖北省武漢市東湖新技術(shù)開發(fā)區(qū)高新大道666號(hào)生物創(chuàng)新園B1棟二樓B274-12室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種RSK4酶活性的快速檢測(cè)方法及其應(yīng)用。檢測(cè)方法為：(1)取待測(cè)樣品、空白對(duì)照、陽性對(duì)照分別與RSK4酶、RSK多肽底物/ATP混合液共孵育進(jìn)行激酶反應(yīng)產(chǎn)生ADP；(2)向步驟(1)的三組激酶反應(yīng)體系中分別添加ADP?GloTM反應(yīng)試劑共孵育，終止激酶反應(yīng)并消耗完剩余ATP；(3)向步驟(2)的三組反應(yīng)體系中分別添加激酶檢測(cè)試劑共孵育，使ADP轉(zhuǎn)化成ATP，并讀取新合成的ATP的發(fā)光值RLU；(4)按酶活＝(RLU(Sample)?RLU(Blank))/(RLU(Pos.Ctrl)?RLU(Blank))×100％計(jì)算酶活。該方法基于ADP?GloTM激酶實(shí)驗(yàn)，直接測(cè)定反應(yīng)中消耗的ATP來定量反應(yīng)的進(jìn)程。該方法在普通實(shí)驗(yàn)室條件下操作，避免對(duì)操作人員和環(huán)境造成輻射傷害；且體系穩(wěn)定，測(cè)定數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度高，可應(yīng)用于RSK4靶點(diǎn)抑制劑的篩選和RSK4靶點(diǎn)抗腫瘤藥物的篩選。