一種基于誘導(dǎo)型昆蟲細(xì)胞生產(chǎn)AAV基因藥物的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202110119279.5 申請日 -
公開（公告）號 CN112852880A 公開（公告）日 2021-05-28
申請公布號 CN112852880A 申請公布日 2021-05-28
分類號 C12N15/55(2006.01)I;C12N15/864(2006.01)I;C12N15/35(2006.01)I;C12N9/48(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/866(2006.01)I;C07K14/47(2006.01)I;C12N7/01(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 董文吉;劉子瑾;趙忠亮;曹帆;程謨斌;張艷君 申請（專利權(quán)）人 中吉智藥（南京）生物技術(shù)有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京易捷勝知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 齊勝杰
地址 211199江蘇省南京市江北新區(qū)新錦湖路3-1號中丹生態(tài)生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)園一期A座618室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種基于誘導(dǎo)型昆蟲細(xì)胞生產(chǎn)AAV基因藥物的方法，所述方法包括：(1)分別構(gòu)建用于包裝腺相關(guān)病毒的Rep基因質(zhì)粒、Cap基因質(zhì)粒和目的基因質(zhì)粒；其中Rep基因質(zhì)粒和Cap基因質(zhì)粒含有晚期啟動子；(2)將構(gòu)建的三個質(zhì)粒整合到Sf9昆蟲細(xì)胞基因組上，得到可生產(chǎn)AAV的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株；(3)大量擴(kuò)增、培養(yǎng)所述穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株；在需要生產(chǎn)AAV時，用不攜帶外源基因的桿狀病毒，感染所述穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株，以誘導(dǎo)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株中的晚期啟動子激活并驅(qū)動Rep基因和Cap基因表達(dá)，包裝生產(chǎn)AAV。該方法不需要使用攜帶外源基因的桿狀病毒，因此不會帶來因桿狀病毒大量復(fù)制擴(kuò)增所帶來的外源基因丟失的問題，有利于獲得穩(wěn)定的AAV產(chǎn)物，進(jìn)一步簡化AAV生產(chǎn)步驟，提高生產(chǎn)效率，實現(xiàn)AAV的大規(guī)?；咝a(chǎn)并降低成本。??