哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)啟動(dòng)子及其制造和使用方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201611139166.7 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN106754921A 公開(kāi)（公告）日 2017-05-31
申請(qǐng)公布號(hào) CN106754921A 申請(qǐng)公布日 2017-05-31
分類號(hào) C12N15/113(2010.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/86(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張春波;孫浩 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 南京羚諾生物醫(yī)藥技術(shù)研究院有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 孫浩;南京謀新生物技術(shù)有限公司
地址 211200 江蘇省南京市鼓樓區(qū)五臺(tái)花園9幢1003室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)啟動(dòng)子及其制造和使用方法，該方法包括以下步驟：步驟一，通過(guò)化學(xué)合成的方式合成引物；步驟二，通過(guò)PCR反應(yīng)，獲得啟動(dòng)子序列；步驟三，通過(guò)限制性酶切位點(diǎn)：BglII?和Kpn1，上述啟動(dòng)子序列插入包含有ori、卡納抗性基因、sv40、sv40?polyA、多酶切位點(diǎn)序列的質(zhì)粒骨架中，得到?pHep/L1質(zhì)粒；步驟四，轉(zhuǎn)染入E.Coli大腸桿菌進(jìn)行質(zhì)粒擴(kuò)增，提取質(zhì)粒，進(jìn)行測(cè)序；步驟五，將新獲得的質(zhì)粒插入SEAP和IL10目的基因，通過(guò)CsCL密度梯度離心法提取純凈質(zhì)粒。本發(fā)明提高現(xiàn)有質(zhì)粒和AAV病毒的表達(dá)效率。