一種高通量水產(chǎn)養(yǎng)殖抗生素抗性基因的定量檢測方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202011445483.8 申請日 -
公開（公告）號 CN112501325A 公開（公告）日 2021-03-16
申請公布號 CN112501325A 申請公布日 2021-03-16
分類號 C12N15/63(2006.01)I;C12Q1/6806(2018.01)I;C12Q1/6851(2018.01)I;C12Q1/689(2018.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 那廣水;張鴻;高會;李瑞婧;金帥辰;李西清;王璇;趙琨 申請（專利權(quán)）人 安徽微分基因科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 安徽申策知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 程艷梅
地址 116085遼寧省大連市沙河口區(qū)凌河街42號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種高通量水產(chǎn)養(yǎng)殖抗生素抗性基因的定量檢測方法，包括水產(chǎn)養(yǎng)殖樣本的采集，處理、核酸抽提、標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制、高通量qPCR檢測和數(shù)據(jù)處理，四環(huán)素抗生素抗性基因包括tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetH、tetL、tetM、tetO、tetQ、tetS、tetW、tetX、tetBP等14種；14種標(biāo)準(zhǔn)品構(gòu)建過程：(1)通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增出耐藥基因的DNA片段；(2)切膠回收耐藥基因的普通PCR產(chǎn)物；(3)PCR產(chǎn)物一代測序，并與NCBI數(shù)據(jù)庫比對，比對確定是相對應(yīng)的基因再進(jìn)行下一步；(4)將回收的普通PCR產(chǎn)物與克隆載體連接成環(huán)狀質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)菌進(jìn)行克隆，通過質(zhì)粒攜帶的抗性基因篩選出陽性克隆子，分離純化后提取質(zhì)粒；(5)對質(zhì)粒插入片段進(jìn)行一帶測序，跟(3)的序列進(jìn)行比對，吻合即為該基因的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品。??