一種用于檢測單個CAR-T細胞的慢病毒載體拷貝數的方法及其應用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202210406094.7 申請日 -
公開（公告）號 CN114686576A 公開（公告）日 2022-07-01
申請公布號 CN114686576A 申請公布日 2022-07-01
分類號 C12Q1/686（2018.01）I;C12N15/11（2006.01）I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張同存;張琴星 申請（專利權）人 武漢科技大學
代理機構 武漢紅觀專利代理事務所（普通合伙） 代理人 -
地址 430000湖北省武漢市和平大道947號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提出了一種用于檢測單個CAR?T細胞的慢病毒載體拷貝數的方法，包括如下步驟：S1，以β?globin為內參基因，設計β?globin的qPCR引物和探針，利用β?globin的質粒模板建立標準曲線1；S2，設計目的基因的引物和探針，利用目的基因的質粒模板建立標準曲線2；S3，分別使用β?globin和目的基因的qPCR引物對待測樣本進行PCR擴增，從標準曲線1上計算出待測樣本的β?globin拷貝數，從標準曲線2上計算出待測樣品的CAR拷貝數，然后根據公式計算出目的基因相對細胞數的拷貝數。本發(fā)明以β?globin為內源參照基因，能夠穩(wěn)定且有效地檢測出整合入CAR?T細胞基因組中整合的病毒載體拷貝數，且能夠換算成平均每個CAR?T細胞基因組中整合的病毒載體拷貝數。