多重擴增子測序用引物系統(tǒng)、其應(yīng)用以及測序文庫的構(gòu)建方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201710814297.9 申請日 -
公開（公告）號 CN109486923B 公開（公告）日 2022-02-18
申請公布號 CN109486923B 申請公布日 2022-02-18
分類號 C12Q1/6869（2018.01）I;C12N15/11（2006.01）I;C40B50/06（2006.01）I;C12N15/10（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 羅景燕;唐毅;何廣良;林釗;李偉琴;許少飛;賴炳權(quán);周艷河 申請（專利權(quán)）人 廣州永諾生物科技有限公司
代理機構(gòu) 廣州華進聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 代理人 林青中;萬志香
地址 510300廣東省廣州市開發(fā)區(qū)廣州國際生物島螺旋三路6號第四層
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種多重擴增子測序用引物系統(tǒng)、其應(yīng)用及測序文庫的構(gòu)建方法。該引物系統(tǒng)包括第一輪反向特異性引物組和第二輪正向特異性引物組。其中第一輪反向特異性引物組包括多個不同的第一輪反向特異性引物，每個所述反向特異性引物從5’端至3’端分別為反向接頭序列、條形碼序列和反向特異性序列。分子條形碼序列提供了一種很好的方法來跟蹤錯配，利用下游分析，聚合酶在PCR過程中產(chǎn)生的錯配可以與原始分子中出現(xiàn)的序列變異區(qū)分開來，最后通過去除低水平的假陽性來提高1％或更低的突變的檢測準(zhǔn)確率。通過計算讀數(shù)中唯一的分子條形碼序列數(shù)量，而不是計算總讀數(shù)的數(shù)量，也可以更好地實現(xiàn)目標(biāo)量化，因為總讀數(shù)更有可能被非均一性擴增的所誤讀。