一種適用于植物ATAC-seq測序技術(shù)的文庫構(gòu)建方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201910213078.4 申請日 -
公開（公告）號 CN109880887A 公開（公告）日 2019-06-14
申請公布號 CN109880887A 申請公布日 2019-06-14
分類號 C12Q1/6806（2018.01）I; C12Q1/6869（2018.01）I; C40B50/06（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 嚴(yán)琰 申請（專利權(quán)）人 嘉興菲沙基因信息有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 馮子玲
地址 314000 浙江省嘉興市嘉善縣大云鎮(zhèn)創(chuàng)業(yè)路555號C2幢101室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種適用于植物ATAC?seq測序技術(shù)的文庫構(gòu)建方法，包括：1)制備植物單細(xì)胞懸液；2)Nuclei Extraction Buffer裂解細(xì)胞膜，獲得細(xì)胞核并純化；所述純化方法為以下處理：依次經(jīng)細(xì)胞核提純緩沖液提純細(xì)胞核、經(jīng)細(xì)胞核分離緩沖液進(jìn)行密度梯度離心分離細(xì)胞核；3)收集細(xì)胞核進(jìn)行定量和細(xì)胞核完整性檢測；4)完整細(xì)胞核中加入轉(zhuǎn)座酶進(jìn)行轉(zhuǎn)座反應(yīng)并純化；5)PCR擴(kuò)增，構(gòu)建二代文庫并純化；6)進(jìn)行高通量測序，得到基因數(shù)據(jù)。本發(fā)明的技術(shù)方案可去除植物組織中葉綠體、糖類和酚類物質(zhì)對建庫的影響，同時在去除雜質(zhì)時也保證細(xì)胞核的穩(wěn)定性；該方法基于轉(zhuǎn)座酶對DNA含量敏感的特征，直接通過DNA含量進(jìn)行定量操作，適用性廣，尤其適用于物種或組織稀少、保存狀態(tài)較差組織進(jìn)行文庫構(gòu)建。