肺泡灌洗病原微生物宏基因組去除宿主化核酸提取方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202110452400.6 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN112899270A 公開（公告）日 2021-06-04
申請(qǐng)公布號(hào) CN112899270A 申請(qǐng)公布日 2021-06-04
分類號(hào) C12N15/10 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 易康;王宗秀 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 南京諾因生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 南京禾易知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 張松云
地址 211800 江蘇省南京市江北新區(qū)新錦湖路3-1號(hào)中丹生態(tài)生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)園一期A座1802-1807
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提出了一種肺泡灌洗病原微生物宏基因組去除宿主化核酸提取方法，包括如下步驟：S1、差異裂解去宿主：取樣離心棄上清，重懸于PBS溶液中，加入皂素溶液孵育后加入無(wú)菌水再次孵育；加入NaCl震蕩均勻后離心棄上清，重新懸浮于PBS溶液中；S2、去除宿主DNA：向S1中所得溶液中加入PMA溶液，經(jīng)歷黑暗孵育以及光照孵育；S3、微生物菌體破壁：采用研磨珠以及溶菌酶對(duì)S2中得到的溶液進(jìn)行破壁處理；S4、核酸提取：對(duì)S3得到的溶液進(jìn)行DNA提取，并檢測(cè)質(zhì)量。本發(fā)明通過(guò)使用疊氮溴化丙錠（PMA）。當(dāng)暴露在可見光下時(shí)，PMA分子的疊氮基被光解裂解，并發(fā)生C?H插入反應(yīng)，與DNA形成共價(jià)鍵，可有效地從下游分析中消除任何暴露的DNA。