超敏化學(xué)發(fā)光酶免法測(cè)定人腫瘤可溶性蛋白sp185Her－2

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN200510056656.6 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN1731188A 公開（公告）日 2006-02-08
申請(qǐng)公布號(hào) CN1731188A 申請(qǐng)公布日 2006-02-08
分類號(hào) G01N33/574(2006.01);G01N33/543(2006.01);G01N21/76(2006.01) 分類 測(cè)量；測(cè)試;
發(fā)明人 蔡楓 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 浙江亞克藥業(yè)有限公司
代理機(jī)構(gòu) - 代理人 -
地址 310053浙江省杭州市濱江區(qū)濱康路677號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明一種用超敏化學(xué)發(fā)光酶聯(lián)免疫吸附定量測(cè)定人Her－2/Neu癌基因可溶性產(chǎn)物sp185Her－2的方法。使用奧地利Bender MedSystemsGmbH公司的一對(duì)抗sp185Her－2單克隆抗體，采納固相雙位點(diǎn)夾心式酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，用抗sp185Her－2單克隆抗體包埋小容量微孔后，樣本中sp185Her－2結(jié)合在包埋抗體上；加入辣根過(guò)氧化酶(HRP)聯(lián)結(jié)的單克隆抗sp185Her－2抗體后，它和已被第一抗體捕獲的sp185Her－2結(jié)合；孵育后洗除未結(jié)合的抗sp185Her－2酶聯(lián)結(jié)抗體；加入辣根過(guò)氧化酶超敏化學(xué)發(fā)光底物后；通過(guò)化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定425nm處發(fā)光量來(lái)定量樣本中sp185Her－2濃度。本法檢測(cè)線性范圍0－10ng/mlsp185Her－2(R2＝0.9999)，最低檢測(cè)限度40.15pg/ml sp185Her－2。本發(fā)明改進(jìn)Bender MedSystems ELISA，采用小容量微孔板，在不影響反應(yīng)敏感性的前提下，減少了包埋抗體和其他反應(yīng)試劑的使用量，加快了反應(yīng)速度；采用超敏化學(xué)發(fā)光底物和化學(xué)發(fā)光儀，加寬了檢測(cè)線性范圍，使檢測(cè)限度下移，提高了反應(yīng)敏感性。人血清Her－2/Neu癌基因可溶性產(chǎn)物sp185Her－的測(cè)定，實(shí)時(shí)觀察乳腺癌患者術(shù)后sp185Her－含量的變化，有助于預(yù)后的臨床評(píng)估。本發(fā)明為進(jìn)一步研發(fā)臨床適用的診斷試劑盒奠定了基礎(chǔ)。