一種抗人CD25嵌合單克隆抗體及其制備方法和應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201611167733.X 申請日 -
公開（公告）號 CN108084263B 公開（公告）日 2021-07-13
申請公布號 CN108084263B 申請公布日 2021-07-13
分類號 C07K16/28;A61K39/395;A61P35/00 分類 有機(jī)化學(xué)〔2〕;
發(fā)明人 張學(xué)光 申請（專利權(quán)）人 蘇州旭光科星抗體生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 馮子玲
地址 215000 江蘇省蘇州市蘇州高新區(qū)錦峰路8號12號樓302室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種抗人CD25嵌合單克隆抗體及其制備方法，包含編碼所述抗體的可變區(qū)的氨基酸序列，制備方法，抗體功能鑒定。本發(fā)明從分泌抗人CD25單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞中提取重鏈可變區(qū)（mVH）和輕鏈可變區(qū)（mVL），并與克隆載體（pJET cloning vector）連接，轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌DH5a，根據(jù)測序結(jié)果保留候選的重輕鏈可變區(qū)序列，再次PCR擴(kuò)增出與表達(dá)載體匹配的重鏈、輕鏈可變區(qū)序列，將PCR產(chǎn)物與雙酶切預(yù)先處理的線性表達(dá)載體連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)菌DH5a，擴(kuò)大培養(yǎng)后進(jìn)行質(zhì)粒抽提。連接有目的單抗重鏈和輕鏈可變區(qū)基因的表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染真核表達(dá)細(xì)胞株293。培養(yǎng)收獲的上清含有目的抗體，流式檢測表達(dá)單抗與PBMC結(jié)合良好，陽性率達(dá)95%以上，獲得CD25鼠/人嵌合抗體。