出生缺陷細(xì)胞庫(kù)及其構(gòu)建方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN200910152257.8 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN101942413B 公開（公告）日 2015-02-11
申請(qǐng)公布號(hào) CN101942413B 申請(qǐng)公布日 2015-02-11
分類號(hào) C12N5/10(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 翁炳煥 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 浙江同創(chuàng)醫(yī)療科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) - 代理人 -
地址 310000 浙江省杭州市下城區(qū)華中南路672號(hào)3幢405、501室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的出生缺陷細(xì)胞庫(kù)及其構(gòu)建方法，其主要特征是以BamH?I、SV40?DNA、T4?DNA連接酶和基因載體pcDNA3.1構(gòu)建SV40T/pcDNA3.1重組子，經(jīng)感受態(tài)大腸桿菌擴(kuò)增、純化后，以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組子導(dǎo)入經(jīng)0.01％膠原酶II消化的離體懸液狀出生缺陷細(xì)胞或在含20％胎牛血清、5～10nmol/L胰島素的培養(yǎng)液中處于將進(jìn)入或剛進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、梭形細(xì)胞占90％以上、匯合率達(dá)55％～65％的貼壁生長(zhǎng)狀出生缺陷細(xì)胞，并與之DNA整合，以G418篩選的含陽(yáng)性重組子的細(xì)胞和EB病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞作傳代、擴(kuò)增培養(yǎng)，構(gòu)建出生缺陷細(xì)胞系并凍存于液氮中，以出生缺陷(Birth?Defect)及其病種的第一個(gè)英文字母命名并標(biāo)明相關(guān)資料信息，用以集中保存出生缺陷的活細(xì)胞資源，解決其科研材料貧乏和無專一出生缺陷細(xì)胞庫(kù)的問題。