一種丙氨酸消旋酶的突變體酶蛋白及其制備方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201910691113.3 申請日 -
公開（公告）號 CN110669751B 公開（公告）日 2022-06-14
申請公布號 CN110669751B 申請公布日 2022-06-14
分類號 C12N9/90（2006.01）I;C12N15/60（2006.01）I;C12N15/70（2006.01）I;C12P13/06（2006.01）I;C12R1/19（2006.01）N 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 鞠建松;韓卿卿;徐書景;任曉樸;竇金萍;郭博涵;何廣正;趙寶華 申請（專利權(quán)）人 河北師范大學(xué)
代理機(jī)構(gòu) 石家莊新世紀(jì)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 代理人 -
地址 050024河北省石家莊市南二環(huán)東路20號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種丙氨酸消旋酶的突變體酶蛋白及其制備方法。根據(jù)同源序列二級結(jié)構(gòu)比對結(jié)果，通過定點(diǎn)突變技術(shù)將騰沖嗜熱厭氧菌中丙氨酸消旋酶的173、360兩個位點(diǎn)分別突變，構(gòu)建雙點(diǎn)突變表達(dá)載體pET?S173Q/Q360Y，通過原核表達(dá)、純化獲得酶蛋白。所獲得的突變體蛋白對底物L(fēng)?Ala的表觀二級速率常數(shù)kcat/Km為18.44 s?1·mM?1，平衡常數(shù)Keq（L/D）為3.95，是野生型蛋白的68.30和3.69倍，且突變體蛋白的半衰期也有一定程度的提升。由于突變體蛋白可以提高反應(yīng)產(chǎn)物D?Ala的轉(zhuǎn)化效率，因此，本突變體可以作為生物合成D?Ala的元器件，有較好的應(yīng)用價值。