一種多重巢式PCR方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202110504701.9 申請日 -
公開（公告）號 CN113186286A 公開（公告）日 2021-07-30
申請公布號 CN113186286A 申請公布日 2021-07-30
分類號 C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 鐘晟;胡新蕾;嚴(yán)曉芹;閆子玥 申請（專利權(quán)）人 成都泰萊醫(yī)學(xué)檢驗實驗室有限公司
代理機構(gòu) 深圳市優(yōu)賽朝聞專利代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 譚育華
地址 610017 四川省成都市高新區(qū)天府大道北段1480號1棟A座5層21、23號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種多重巢式PCR方法，涉及基因標(biāo)志物檢測技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明利用多重PCR和巢式PCR相結(jié)合，利用4種目的基因的基因標(biāo)志物，設(shè)計全新的PCR引物，針對cfDNA5hmC富集捕獲文庫，使用touchdownPCR及熱啟動PCR方法進(jìn)行多重巢式PCR擴增，避免PCR過程中引物二聚體、發(fā)夾結(jié)構(gòu)的形成，保證了PCR擴增的特異性，進(jìn)而完成靶序列的富集，得到二代測序靶向測序文庫；通過對4個目的基因的羥甲基化狀態(tài)的高效檢測，實現(xiàn)在較低測序深度下完成對基因標(biāo)志物中5hmC含量的檢測，從而大幅降低測序成本，成為一種高效率、低成本的肝癌早期診斷檢測手段。