一種具有多等位基因p53編碼序列的重組腺病毒的制備方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202010386150.6 申請日 -
公開（公告）號 CN111534546A 公開（公告）日 2020-08-14
申請公布號 CN111534546A 申請公布日 2020-08-14
分類號 C12N15/861(2006.01)I 分類 -
發(fā)明人 迪奧斯達·德鮑蒂斯塔;徐衛(wèi) 申請（專利權）人 賽諾（深圳）生物醫(yī)藥研究有限公司
代理機構(gòu) 深圳市卓科知識產(chǎn)權代理有限公司 代理人 趙輝麗;潘曉
地址 518000廣東省深圳市南山區(qū)粵海街道高新技術產(chǎn)業(yè)園(中區(qū))科技中一路19號賽百諾基因治療園
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種具有多等位基因p53編碼序列的重組腺病毒的制備方法，包括有如下步驟：采用寡核苷酸的第一DNA接頭修飾pUC18質(zhì)粒，并將含有p53表達盒的片段克隆至修飾后質(zhì)粒中，然后分別采用第二DNA接頭及第三DNA接頭修飾后得到的兩種質(zhì)粒進行匹配產(chǎn)生具有p53等位基因雙拷貝的中間質(zhì)粒，將中間質(zhì)粒中的SpeI?SalI片段導入至穿梭質(zhì)粒中，獲得p53等位基因雙拷貝的穿梭質(zhì)粒將穿梭質(zhì)粒pSTL?TDMp53(1+2)采用Pme1酶切使之線性化，然后和伙伴pAdEasy質(zhì)粒一起通過電穿孔導入進宿主細菌，通過宿主細菌的細胞內(nèi)進行同源重組，提取其含有p53編碼序列等位基因雙拷貝的表達盒和腺病毒骨架的質(zhì)粒，然后通過電穿孔手段導入HEK?293細胞，產(chǎn)生具有p53編碼序列等位基因雙拷貝的重組腺病毒。??