基于半連接PCR技術(shù)的二代測序文庫構(gòu)建方法及試劑盒

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201910119367.8 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN111575357A 公開（公告）日 2020-08-25
申請(qǐng)公布號(hào) CN111575357A 申請(qǐng)公布日 2020-08-25
分類號(hào) C12Q1/6869;C12Q1/686;C40B50/06 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 王力剛 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 北京全譜醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司
代理機(jī)構(gòu) - 代理人 -
地址 100000 北京市大興區(qū)亦莊經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)科創(chuàng)六街88號(hào)E2座101室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明屬于分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及一種基于半連接PCR技術(shù)的二代測序文庫構(gòu)建方法及其應(yīng)用。本發(fā)明實(shí)現(xiàn)方式有兩種：（1）通過去除打斷雙鏈DNA 5’?磷酸基團(tuán)，阻斷打斷后DNA雙鏈兩5’端與接頭連接；而接頭的另一條鏈含有5’?磷酸基團(tuán)，能夠與打斷后DNA雙鏈兩3’端連接，從而實(shí)現(xiàn)半連接。（2）通過在連接接頭的3’端進(jìn)行分子修飾，此分子修飾可以阻斷接頭平末端3’端與打斷后DNA的5’端連接。本發(fā)明在將雙鏈DNA打斷后，通過半連接的方式針對(duì)含有UBC序列的DNA區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增，同時(shí)引入測序接頭，集合了三種方法的優(yōu)勢，還有效避免了不含UBC序列的形成測序文庫，非特異擴(kuò)增，片斷分布不集中等缺點(diǎn)。