基于piggyBAC系統(tǒng)構(gòu)建基因過表達(dá)或干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201811619985.0 申請日 -
公開（公告）號 CN109628488A 公開（公告）日 2019-04-16
申請公布號 CN109628488A 申請公布日 2019-04-16
分類號 C12N15/85（2006.01）I; C12N15/65（2006.01）I; C12N5/10（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 鄭敦武; 段偉婷; 程冬洋 申請（專利權(quán)）人 賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 代理人 賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司; 賽業(yè)模式生物研究中心（太倉）有限公司
地址 215400 江蘇省蘇州市太倉市城廂鎮(zhèn)人民南路162號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了基于piggyBAC系統(tǒng)構(gòu)建基因過表達(dá)或干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的方法，包括如下步驟:將基因過表達(dá)或干擾元件片段、熒光標(biāo)記片段及抗性篩選片段依次插入到piggyBAC載體的ITR片段之間，構(gòu)建載體，然后將構(gòu)建的載體和pBase表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染細(xì)胞，進(jìn)行抗性篩選，選取抗性存活細(xì)胞，進(jìn)行Q?PCR檢測，將pBase?MU質(zhì)粒轉(zhuǎn)入陽性克隆中，在突變型pBase的作用下將ITR之間序列整體切除，原位點(diǎn)不殘余任何序列，確認(rèn)切除成功后，對陽性克隆進(jìn)行凍存。本發(fā)明的方法將基因過表達(dá)或干擾元件插入ITR之間，構(gòu)建piggyBAC穩(wěn)轉(zhuǎn)載體。沒有基因大小的限制，可以對較大的基因或多個基因同時進(jìn)行過表達(dá)操作。