一種降鈣素原突變體蛋白的原核重組表達(dá)及純化方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202010336642.4 申請日 -
公開（公告）號 CN111996195A 公開（公告）日 2020-11-27
申請公布號 CN111996195A 申請公布日 2020-11-27
分類號 C12N15/16(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 霍棟棟;劉淑香;楊文魁;焦虎平;曾麗亞;夏志平;游可為;陳浩源 申請（專利權(quán)）人 潤方（長春）生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 長春吉大專利代理有限責(zé)任公司 代理人 張巖
地址 130000吉林省長春市市轄區(qū)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)開發(fā)區(qū)超越大街與創(chuàng)意路交匯處漢森香榭里27號樓102室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種降鈣素原突變體蛋白的原核重組表達(dá)及純化方法，包括重組降鈣素原蛋白的基因克隆，重組PCT表達(dá)載體的構(gòu)建，重組PCT表達(dá)菌的構(gòu)建，重組PCT表達(dá)菌的誘導(dǎo)表達(dá)，以及重組PCT的分離純化。通過分析PCT蛋白結(jié)構(gòu)，對天然PCT蛋白序列進(jìn)行了改造，對易降解位點進(jìn)行了序列替換(利用?Ala58?Ala59?和?Ala92?Ala93?Ala94?Ala95?替換了?Lys58?Arg59?和?Gly92?Lys93?Lys94?Arg95?)，制備具有天然免疫原性的高純度重組PCT蛋白，提高了PCT蛋白的穩(wěn)定性，同時保持了原有的免疫原性；利用基因合成技術(shù)替代了原有的PCR技術(shù)制備目的基因，提高了基因操作的準(zhǔn)確性和工作效率，縮短了表達(dá)菌構(gòu)建的實驗周期；設(shè)計了完整的蛋白表達(dá)純化體系，得到的突變體蛋白可以作為標(biāo)準(zhǔn)抗原用于制備單克隆抗體，或作為標(biāo)準(zhǔn)品用于PCT的免疫學(xué)檢測。??