一種特異識別AAV9衣殼蛋白的多克隆抗體及制備方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202210396426.8 申請日 -
公開（公告）號 CN114685651A 公開（公告）日 2022-07-01
申請公布號 CN114685651A 申請公布日 2022-07-01
分類號 C07K16/08（2006.01）I;C07K16/06（2006.01）I;C12N15/70（2006.01）I;C12N15/35（2006.01）I;G01N33/569（2006.01）I 分類 有機化學〔2〕;
發(fā)明人 呂亞豐;曹春雨;李舒月;張浩;秦宇;楊建林;王靜 申請（專利權(quán)）人 三峽大學
代理機構(gòu) 宜昌市三峽專利事務所 代理人 -
地址 443002湖北省宜昌市西陵區(qū)大學路8號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供一種特異識別AAV9衣殼蛋白的多克隆抗體及制備方法，將8處AAV9衣殼可變區(qū)氨基酸序列依次連接即為本發(fā)明所指AAV9可變區(qū)VR的氨基酸序列SEQ ID NO.1，由氨基酸序列得到編碼AAV9衣殼可變區(qū)的DNA序列如SEQ ID NO.2，將DNA序列插入到原核表達載體pET30a獲得質(zhì)粒pET30a?AAV?VR，轉(zhuǎn)化大腸桿菌擴增，采用IPTG誘導表達多價抗原肽，在變性條件下經(jīng)Ni?NTA樹脂進行純化，然后透析復性，純化得到AAV9可變區(qū)蛋白免疫日本大耳朵白兔，以此制備多克隆抗體，ELISA檢測抗體效價，Western?blot及細胞免疫熒光檢測抗體的應用。抗體效價為1:10240000，該抗體能特異性識別AAV9衣殼蛋白序列。為后續(xù)AAV載體開發(fā)以及AAV生物學功能研究奠定了基礎。