一種Cas蛋白特異結(jié)合靶標(biāo)DNA、調(diào)控靶標(biāo)基因轉(zhuǎn)錄的方法及試劑盒

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201710152120.7 申請日 -
公開（公告）號 CN106978428A 公開（公告）日 2017-07-25
申請公布號 CN106978428A 申請公布日 2017-07-25
分類號 C12N15/63;C12N15/70 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 成秋香 申請（專利權(quán)）人 上海吐露港生物科技有限公司
代理機構(gòu) 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 馮子玲
地址 201899 上海市嘉定區(qū)菊園新區(qū)樹屏路588弄51號3012室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種Cas蛋白結(jié)合DNA的方法，尤其是能夠方便、快速、高效地針對一個或者多個靶進(jìn)行基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的方法、以及用于所述方法的試劑盒。確定基因組上的目標(biāo)靶點，找到目標(biāo)靶點左右區(qū)域內(nèi)Cas蛋白（所述Cas蛋白為保留RNA酶活力、缺失DNA酶活力的Cas蛋白突變體）結(jié)合所需的PAM位點，針對所述PAM位點設(shè)計向?qū)蛄?，確定所述Cas蛋白的同向重復(fù)序列，并構(gòu)建轉(zhuǎn)錄所述同向重復(fù)序列與向?qū)蛄邢噙B的crRNA序列的crRNA質(zhì)粒；將Cas蛋白的編碼基因與轉(zhuǎn)錄所述crRNA質(zhì)粒在細(xì)胞內(nèi)共表達(dá)，即可使Cas蛋白特異地結(jié)合到目標(biāo)靶點。采用本發(fā)明的方法，可以抑制一個或多個靶標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄，整個操作過程與CRISPR/dCas9相比，操作過程非常簡單，且編輯效率與dCas9相當(dāng)。