一種FFPE組織樣本的超低頻建庫(kù)方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201711355441.3 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN107916288A 公開(kāi)（公告）日 2018-04-17
申請(qǐng)公布號(hào) CN107916288A 申請(qǐng)公布日 2018-04-17
分類(lèi)號(hào) C12Q1/6806;C12N15/10;C40B50/06 分類(lèi) 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張仕堅(jiān);嚴(yán)建龍 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 普瑞基準(zhǔn)科技（北京）有限公司
代理機(jī)構(gòu) 北京華識(shí)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 普瑞基準(zhǔn)科技（北京）有限公司
地址 100000 北京市海淀區(qū)清河三街72號(hào)23號(hào)樓2層2166室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種FFPE組織樣本的超低頻建庫(kù)方法，步驟包括：FFPE樣本的DNA提??；DNA打斷；去磷酸化與DNA變性；生物素UID單鏈接頭的添加；鏈霉素磁珠捕獲與洗脫；雙鏈第二接頭的添加與文庫(kù)洗脫：通過(guò)T4DNA連接酶，在上述靶DNA分子的另一端加上第二個(gè)接頭，并洗去過(guò)剩與殘留的接頭；LM?PCR擴(kuò)增，引入barcode；磁珠純化PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。本發(fā)明針對(duì)某些嚴(yán)重降解的FFPE DNA微量樣本實(shí)現(xiàn)建庫(kù)捕獲測(cè)序，在建庫(kù)開(kāi)始前通過(guò)引入U(xiǎn)ID標(biāo)簽接頭，從而為后續(xù)排除建庫(kù)、捕獲以及上機(jī)測(cè)序過(guò)程中引入的技術(shù)突變提供前提條件。