一種溶瘤腺病毒的構(gòu)建方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201911097478.X 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN110747228A 公開（公告）日 2020-02-04
申請(qǐng)公布號(hào) CN110747228A 申請(qǐng)公布日 2020-02-04
分類號(hào) C12N15/85;C12N7/01;A61P35/00;C12R1/93 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 劉駿;徐金鳳;金麗;周春艷;謝偉建 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 復(fù)百澳（蘇州）生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 蘇州周智專利代理事務(wù)所（特殊普通合伙） 代理人 周雅卿
地址 215024 江蘇省蘇州市工業(yè)園區(qū)若水路398號(hào)D棟
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種溶瘤腺病毒的構(gòu)建方法，包括以下步驟：步驟一：在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中調(diào)取Human mastadenovirus C全基因組序列信息和Tert?p啟動(dòng)子序列，根據(jù)Tert?p、E1A、E1B及的E1A和E1B之間的鏈接區(qū)域(FBLink)序列信息，在通用生物系統(tǒng)(安徽)有限公司進(jìn)行化學(xué)合成至PUC57載體，得到PUC57?Tert?E1A?FBLink?E1B質(zhì)粒；步驟二：設(shè)計(jì)引物對(duì)PUC57?Tert?E1A?FBLink?E1B質(zhì)粒進(jìn)行擴(kuò)增；步驟三：腺病毒載體經(jīng)SacII酶切；步驟四：同源重組法構(gòu)建FV012?Tert?E1A?FBLink?E1B溶瘤腺病毒載體；步驟五：將步驟四得到的載體和腺病毒骨架質(zhì)粒PBHG轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中進(jìn)行病毒包裝，待細(xì)胞出現(xiàn)病變后，得到目的溶瘤腺病毒。本發(fā)明獲得的溶瘤腺病毒的復(fù)制能力和殺腫瘤細(xì)胞的能力要強(qiáng)于TERT?E1A?IRES?E1B結(jié)構(gòu)的溶瘤腺病毒。