一種基于無縫克隆技術(shù)的H9N2亞型禽流感病毒的拯救方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202011629470.6 申請(qǐng)日 -
公開(公告)號(hào) CN112680477A 公開(公告)日 2021-04-20
申請(qǐng)公布號(hào) CN112680477A 申請(qǐng)公布日 2021-04-20
分類號(hào) C12N7/00(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12R1/93(2006.01)N 分類 生物化學(xué);啤酒;烈性酒;果汁酒;醋;微生物學(xué);酶學(xué);突變或遺傳工程;
發(fā)明人 陳瑞愛;黃梅;張古月;溫良海 申請(qǐng)(專利權(quán))人 華農(nóng)(肇慶)生物產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院有限公司
代理機(jī)構(gòu) 廣州市科豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 代理人 龔元元
地址 526238廣東省肇慶市高新區(qū)創(chuàng)業(yè)路5號(hào)肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司動(dòng)物大樓(生產(chǎn)車間)一樓
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域,公開了一種基于無縫克隆技術(shù)的H9N2亞型禽流感病毒的拯救方法,包括如下步驟:步驟1:提取H9N2亞型禽流感病毒的RNA,并根據(jù)RNA獲得病毒的cDNA;步驟2:以cDNA為模板采用8對(duì)引物擴(kuò)增得到H9N2亞型禽流感病毒8個(gè)片段的PCR產(chǎn)物;步驟3:將PHW2000質(zhì)粒進(jìn)行酶切得到線性化片段;步驟4:將H9N2亞型禽流感病毒8個(gè)片段的PCR產(chǎn)物分別與線性化的PHW2000載體進(jìn)行同源重組得到8種重組質(zhì)粒;步驟5:將8種重組質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染293T及MDCK混合培養(yǎng)細(xì)胞,得到重組的H9N2病毒;其中,8對(duì)引物的序列分別為如序列表SEQ ID NO:2至SEQ ID NO:17所示。該方法的優(yōu)勢(shì)在于:操作簡(jiǎn)單、重組精確、拯救效率高。??