一種基于無縫克隆技術(shù)的H9N2亞型禽流感病毒的拯救方法
基本信息
| 申請(qǐng)?zhí)?/td> | CN202011629470.6 | 申請(qǐng)日 | - |
| 公開（公告）號(hào) | CN112680477A | 公開（公告）日 | 2021-04-20 |
| 申請(qǐng)公布號(hào) | CN112680477A | 申請(qǐng)公布日 | 2021-04-20 |
| 分類號(hào) | C12N7/00(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12R1/93(2006.01)N | 分類 | 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程; |
| 發(fā)明人 | 陳瑞愛;黃梅;張古月;溫良海 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 | 華農(nóng)（肇慶）生物產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院有限公司 |
| 代理機(jī)構(gòu) | 廣州市科豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） | 代理人 | 龔元元 |
| 地址 | 526238廣東省肇慶市高新區(qū)創(chuàng)業(yè)路5號(hào)肇慶大華農(nóng)生物藥品有限公司動(dòng)物大樓（生產(chǎn)車間）一樓 | ||
| 法律狀態(tài) | - | ||
摘要
| 摘要 | 本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，公開了一種基于無縫克隆技術(shù)的H9N2亞型禽流感病毒的拯救方法，包括如下步驟：步驟1：提取H9N2亞型禽流感病毒的RNA，并根據(jù)RNA獲得病毒的cDNA；步驟2：以cDNA為模板采用8對(duì)引物擴(kuò)增得到H9N2亞型禽流感病毒8個(gè)片段的PCR產(chǎn)物；步驟3：將PHW2000質(zhì)粒進(jìn)行酶切得到線性化片段；步驟4：將H9N2亞型禽流感病毒8個(gè)片段的PCR產(chǎn)物分別與線性化的PHW2000載體進(jìn)行同源重組得到8種重組質(zhì)粒；步驟5：將8種重組質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染293T及MDCK混合培養(yǎng)細(xì)胞，得到重組的H9N2病毒；其中，8對(duì)引物的序列分別為如序列表SEQ ID NO：2至SEQ ID NO：17所示。該方法的優(yōu)勢(shì)在于：操作簡(jiǎn)單、重組精確、拯救效率高。?? |
