一種農(nóng)桿菌介導(dǎo)的多主棒孢高效遺傳轉(zhuǎn)化方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201910559279.X 申請日 -
公開（公告）號 CN110257416A 公開（公告）日 2019-09-20
申請公布號 CN110257416A 申請公布日 2019-09-20
分類號 C12N15/80（2006.01）I; C12R1/645（2006.01）N 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 高士剛; 戴富明; 曾蓉; 徐麗慧; 王良軍; 楊曉峰 申請（專利權(quán)）人 上海潤莊農(nóng)業(yè)科技有限公司
代理機構(gòu) 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 馮子玲
地址 201415 上海市奉賢區(qū)莊行鎮(zhèn)葉莊公路888號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提出了一種農(nóng)桿菌介導(dǎo)的多主棒孢高效遺傳轉(zhuǎn)化方法，包括：(1)多主棒孢孢子懸浮液的制備步驟；(2)雙元載體pCAMBIA1300轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌AGL1感受態(tài)細胞；篩選、鑒定陽性農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化子；(3)活化上述陽性農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化子，然后將單菌落轉(zhuǎn)到含利福平和卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)；(4)制備陽性農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化子菌液；(5)混合菌液，并進行孵育；之后在含有乙酰丁香酮的IM培養(yǎng)基中培養(yǎng)；(6)多主棒孢陽性轉(zhuǎn)化子的抗性篩選。本發(fā)明的方法轉(zhuǎn)化效率高，操作簡單。