一種中山杉品種406葉肉原生質(zhì)體分離、純化及高效轉(zhuǎn)化的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201710547595.6 申請日 -
公開（公告）號 CN107267549B 公開（公告）日 2021-01-05
申請公布號 CN107267549B 申請公布日 2021-01-05
分類號 C12N15/82;C12N5/04 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 宣磊;華建峰;王莦豐;王芝權(quán);楊穎;於朝廣;范文才;殷云龍 申請（專利權(quán)）人 江蘇省中國科學(xué)院植物研究所
代理機構(gòu) 南京申云知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 江蘇省中國科學(xué)院植物研究所
地址 210000 江蘇省南京市玄武區(qū)前湖后村1號南京中山植物園
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種中山杉品種406葉肉原生質(zhì)體分離、純化及高效轉(zhuǎn)化的方法，包括：1）以中山杉生長30天長勢良好的組培苗幼嫩葉片為材料，對材料進(jìn)行30h的黑暗預(yù)處理；2）對葉肉原生質(zhì)體進(jìn)行分離和純化；3）從15~20mL過夜培養(yǎng)菌液抽提50~80μg質(zhì)粒，質(zhì)粒為載體p2FGW7.0；4）PEG介導(dǎo)進(jìn)行原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化。本發(fā)明的中山杉品種406葉肉原生質(zhì)體分離、純化及高效轉(zhuǎn)化的方法，其操作簡單易行，除可以獲得大量、完整、純凈的中山杉葉肉原生質(zhì)體外，還可以達(dá)到高達(dá)80%的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化率。從而解決了無法深入研究中山杉基因功能的難題，也為其他針葉樹種原生質(zhì)體瞬時表達(dá)體系建立提供一定的參考及借鑒，將在林木基因工程領(lǐng)域有重要的應(yīng)用價值。