一種快速構(gòu)建蛋白質(zhì)突變體畢赤酵母表達(dá)文庫的方法及其應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202110295630.6 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN112921029A 公開（公告）日 2021-06-08
申請(qǐng)公布號(hào) CN112921029A 申請(qǐng)公布日 2021-06-08
分類號(hào) C12N15/10;C40B50/06;C12N15/81;C12N9/24;C12N9/40;C12N9/04 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 刁文濤;權(quán)淑靜;李珊珊;陳曉飛;劉德海;楊文玲;雷高;周伏忠;張宗源;陳國參;王繼雯;胡虹;李寒冰 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司
代理機(jī)構(gòu) 鄭州天陽專利事務(wù)所（普通合伙） 代理人 聶孟民
地址 450003 河南省鄭州市花園路28號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及快速構(gòu)建蛋白質(zhì)突變體畢赤酵母表達(dá)文庫的方法及其應(yīng)用，可有效解決快速構(gòu)建蛋白質(zhì)突變體畢赤酵母表達(dá)文庫，實(shí)現(xiàn)定向選擇所需性質(zhì)優(yōu)化酶的問題，方法是，將目的基因構(gòu)建到畢赤酵母載體pGAPZα系列載體中，構(gòu)建質(zhì)粒；進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，得PCR產(chǎn)物，PCR產(chǎn)物加入飽和醋酸鈉和乙醇，離心，沉淀室溫晾干，再加入無菌去離子水溶解，按照酵母轉(zhuǎn)化法將PCR產(chǎn)物電轉(zhuǎn)化至畢赤酵母GS115感受態(tài)細(xì)胞中，涂布在含博來霉素的YPDS培養(yǎng)基平板上篩選陽性克隆，提取酵母基因組DNA，再對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序，計(jì)算堿基突變率、基因突變率，實(shí)現(xiàn)快速構(gòu)建蛋白質(zhì)突變體畢赤酵母表達(dá)文庫，本發(fā)明方法易操作，省時(shí)省力，工作效率高，應(yīng)用面廣，經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益巨大。