一種發(fā)酵乳糖的大腸桿菌基因組優(yōu)化方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202111619585.1 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN114214352A 公開（公告）日 2022-03-22
申請(qǐng)公布號(hào) CN114214352A 申請(qǐng)公布日 2022-03-22
分類號(hào) C12N15/72（2006.01）I;C12N15/56（2006.01）I;C12P19/00（2006.01）I;C12N1/21（2006.01）I;C12R1/19（2006.01）N 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 劉振云;郭濤 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 黃山同兮生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 蘇州創(chuàng)元專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 代理人 孫周強(qiáng)
地址 245700安徽省黃山市黃山區(qū)甘棠鎮(zhèn)浦園大道30號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種發(fā)酵乳糖的大腸桿菌基因組優(yōu)化方法，包括以下步驟：先將原始pTargetF質(zhì)粒改造為包含兩個(gè)大腸桿菌基因組剪切位點(diǎn)的雙J23119 promoter?N20?gRNA scaffold結(jié)構(gòu)質(zhì)粒，同時(shí)在質(zhì)粒上插入用于修復(fù)大腸桿菌基因組的兩段同源模板及l(fā)acY基因的調(diào)控序列，得到pTargetT；在大腸桿菌本底菌株轉(zhuǎn)入pCas質(zhì)粒后，使用阿拉伯糖誘導(dǎo)表達(dá)λ?Red重組酶，隨后轉(zhuǎn)入pTargetT編輯質(zhì)粒，培養(yǎng)過(guò)夜并經(jīng)過(guò)篩選后去除pTargetT和pCas質(zhì)粒，完成發(fā)酵乳糖的大腸桿菌基因組優(yōu)化。本發(fā)明克服大腸桿菌自身代謝乳糖的缺陷的同時(shí)能保證乳糖作為發(fā)酵底物的充分吸收，提高乳糖在發(fā)酵過(guò)程中的利用率，本方法適用不同lac操縱子的大腸桿菌改造，增加本底菌株的可選項(xiàng)，節(jié)省構(gòu)建菌株時(shí)的成本。