一種準(zhǔn)確的可批量進行體內(nèi)在靶活性評估及脫靶檢測的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202011261285.6 申請日 -
公開（公告）號 CN112501252A 公開（公告）日 2021-03-16
申請公布號 CN112501252A 申請公布日 2021-03-16
分類號 C40B50/06(2006.01)I;C12Q1/6806(2018.01)I;C12Q1/6869(2018.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 謝紅嫻;蘭凱;程歡歡;黃龍 申請（專利權(quán)）人 珠海舒桐醫(yī)療科技有限公司
代理機構(gòu) 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 代理人 岳泉清
地址 519000廣東省珠海市橫琴新區(qū)興盛一路128號珠海富力中心17層1721號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種準(zhǔn)確的可批量進行體內(nèi)在靶活性評估及脫靶檢測的方法，本發(fā)明涉及一種準(zhǔn)確的可批量進行體內(nèi)在靶活性評估及脫靶檢測的方法。本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有檢測sgRNA的在靶活性與脫靶效應(yīng)的方法復(fù)雜，準(zhǔn)確性低的問題，本發(fā)明基于體內(nèi)脫靶檢測GUIDE?seq開發(fā)了高通量的細(xì)胞內(nèi)脫靶檢測手段。具體方法為：1.針對目標(biāo)基因設(shè)計sgRNA；2.合成sgRNA文庫；3.將sgRNA文庫克隆到帶有SpCas9表達(dá)蛋白的質(zhì)粒上；4.文庫細(xì)胞轉(zhuǎn)染；5.GUIDE?seq建庫測序。本發(fā)明檢測結(jié)果更加精確，文庫大大減小，在保證檢測準(zhǔn)確性的同時大大減少實驗的復(fù)雜性，本發(fā)明應(yīng)用于體內(nèi)在靶活性評估及脫靶檢測領(lǐng)域。??