一種通過擴(kuò)增16S rDNA保守區(qū)序列檢測(cè)細(xì)菌的方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201811631519.4 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN109554441A 公開（公告）日 2019-04-02
申請(qǐng)公布號(hào) CN109554441A 申請(qǐng)公布日 2019-04-02
分類號(hào) C12Q1/6851（2018.01）I; C12Q1/689（2018.01）I; C12Q1/14（2006.01）I; C12Q1/10（2006.01）I; C12Q1/04（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 趙簡(jiǎn); 雷穎; 白志慧; 張守梅 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 上海思濟(jì)細(xì)胞技術(shù)中心（有限合伙）
代理機(jī)構(gòu) 上海驍象知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 同濟(jì)大學(xué); 上海思濟(jì)細(xì)胞技術(shù)中心（有限合伙）
地址 200092 上海市楊浦區(qū)四平路1239號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種通過擴(kuò)增16S rDNA保守區(qū)序列檢測(cè)細(xì)菌的方法，利用RT?PCR方法擴(kuò)增細(xì)菌16S rDNA的保守區(qū)序列，標(biāo)準(zhǔn)品為含有16S rDNA部分保守區(qū)序列的pUC57質(zhì)粒，在PCR反應(yīng)體系中含有200nM正向引物，200nM反向引物，再加入適量模板，通過含有16S rDNA部分保守區(qū)序列的pUC57質(zhì)粒建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)待檢測(cè)樣本的CT值來計(jì)算細(xì)菌的濃度。本發(fā)明方法在閾值設(shè)定在10000時(shí)，待檢測(cè)樣本CT值<35，且Tm在83.6℃?85℃之間為細(xì)菌污染，能檢測(cè)的大腸桿菌濃度極限在3?33cfu/μl之間，能檢測(cè)的DNA拷貝數(shù)極限在1.6×102copies左右，2h即可得出結(jié)果。