一種增加CHO細(xì)胞群蛋白表達(dá)量的方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201711247666.7 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN107904257B 公開（公告）日 2021-05-04
申請(qǐng)公布號(hào) CN107904257B 申請(qǐng)公布日 2021-05-04
分類號(hào) C12N15/85;C12N5/10 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 李鵑;張崢;蔡潔行;周偉昌;陳智勝 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 無(wú)錫藥明生物技術(shù)股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 代理人 錢文宇
地址 200131 上海市浦東新區(qū)華京路2號(hào)7層701室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開一種增加CHO細(xì)胞群蛋白表達(dá)量的方法，其利用shRNA技術(shù)控制乳酸代謝通路上關(guān)鍵酶的轉(zhuǎn)錄，具體步驟包括：1)構(gòu)建含有待表達(dá)蛋白序列的質(zhì)粒和含有表達(dá)乳酸代謝通路上關(guān)鍵酶的shRNA的質(zhì)粒；2)將步驟1)中構(gòu)建的質(zhì)粒通過(guò)轉(zhuǎn)染的方法引入CHO細(xì)胞中；3)對(duì)步驟2)中轉(zhuǎn)染后細(xì)胞進(jìn)行抗生素篩選；4)待細(xì)胞狀態(tài)恢復(fù)后，采用步驟3)篩選后的細(xì)胞生產(chǎn)目標(biāo)蛋白；所述表達(dá)乳酸代謝通路上關(guān)鍵酶包括乳酸脫氫酶、丙酮酸脫氫酶激酶。本發(fā)明所提供的方法與傳統(tǒng)CHO細(xì)胞群生產(chǎn)中需要對(duì)pH進(jìn)行密切監(jiān)測(cè)并不斷通過(guò)加入堿來(lái)調(diào)節(jié)相比，此發(fā)明僅僅在轉(zhuǎn)染時(shí)同時(shí)額外共同轉(zhuǎn)染數(shù)個(gè)shRNA質(zhì)粒，不但操作復(fù)雜程度大幅降低，而且對(duì)乳酸降低進(jìn)而最終蛋白產(chǎn)量提高有較大的保障。