人重組組織因子的構(gòu)建表達(dá)、純化方法及其應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN200510012414.7 申請日 -
公開（公告）號 CN1284797C 公開（公告）日 2006-11-15
申請公布號 CN1284797C 申請公布日 2006-11-15
分類號 C07K14/435(2006.01);C07K14/475(2006.01);C12N15/70(2006.01);C12N15/10(2006.01);C12N15/12(2006.01);C12P21/02(2006.01);G01N33/68(2006.01);G01N33/53(2006.01);C12Q1/56(2006.01) 分類 有機(jī)化學(xué)〔2〕;
發(fā)明人 焦進(jìn)安;趙邑;郝建平;李晉川;謝紅;趙峰梅 申請（專利權(quán)）人 太原博奧特生物技術(shù)有限公司
代理機(jī)構(gòu) 山西五維專利事務(wù)所 代理人 太原博奧特生物技術(shù)有限公司
地址 030006山西省太原市師范街110號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及人重組組織因子的構(gòu)建、表達(dá)和純化方法及應(yīng)用。從人胎盤中獲取得到的TF基因片段與phoA質(zhì)粒重組，構(gòu)建質(zhì)粒載體pTF243，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌MM294中，篩選得到工程菌株，接入培養(yǎng)基直接發(fā)酵表達(dá)，得到的菌液先使用Q-Sepharose Fast Flow基質(zhì)離子交換層析，再通過TF單抗免疫親和層析柱吸附洗脫，得到rhTF243蛋白。本發(fā)明中TF隨培養(yǎng)基中磷的消耗而直接表達(dá)，不需增加誘導(dǎo)物和對蛋白質(zhì)進(jìn)行變性與復(fù)性，簡化了發(fā)酵工藝，提高了表達(dá)率，采用TF單抗純化rhTF243蛋白，不會受到不可逆損傷，獲得rhTF243純度95％以上，收率大于60％，制備的PT試劑穩(wěn)定性和敏感性均得到了提高。