一種包含表達(dá)功能性重組人凝血因子Ⅶ載體的宿主細(xì)胞及其高水平表達(dá)方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201410470196.0 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN104293737B 公開（公告）日 2017-06-13
申請(qǐng)公布號(hào) CN104293737B 申請(qǐng)公布日 2017-06-13
分類號(hào) C12N5/10(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N9/64(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 張全愛;趙邑;張祿卿;鄭耀武;何永吉;潘薇薇;趙峰梅;梁雅麗;曹鵬程;趙亞蕊 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 太原博奧特生物技術(shù)有限公司
代理機(jī)構(gòu) 太原晉科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（特殊普通合伙） 代理人 太原博奧特生物技術(shù)有限公司
地址 030006 山西省太原市小店區(qū)師范街50號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種包含表達(dá)功能性重組人凝血因子Ⅶ載體的宿主細(xì)胞及其高水平表達(dá)方法，目的是構(gòu)建含F(xiàn)Ⅶ、GGCX及VKORC1重組核酸的表達(dá)載體，利用GGCX及VKORC1的協(xié)同表達(dá)提高重組FⅦ的g?羧基化修飾；本發(fā)明宿主細(xì)胞包含編碼維生素K依賴的人凝血因子Ⅶ（FⅦ）重組核酸、小鼠維生素K還原酶復(fù)合體亞基1（VKORC1）重組核酸和小鼠g氨基酸羧化酶（GGCX）重組核酸，以及絕緣子insulator（4X）重組核酸；高水平表達(dá)功能性人凝血因子Ⅶ的方法包括構(gòu)建一種表達(dá)載體，利用脂質(zhì)體法將該表達(dá)載體介導(dǎo)進(jìn)入DHFR缺陷型CHO動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，DMEM培養(yǎng)基篩選陽(yáng)性克??；無(wú)血清馴化培養(yǎng)該宿主細(xì)胞株；利用鎳離子親和層析純化hFⅦ重組蛋白，SDS?PAGE及Western?blot檢測(cè)；凝血酶原時(shí)間(PT)測(cè)定FⅦ重組蛋白促凝血活性。