基于高通量測(cè)序的PCR產(chǎn)物大樣本量混合建庫(kù)的文庫(kù)構(gòu)建方法和試劑
基本信息
| 申請(qǐng)?zhí)?/td> | CN201710107944.2 | 申請(qǐng)日 | - |
| 公開(kāi)（公告）號(hào) | CN108504651B | 公開(kāi)（公告）日 | 2018-09-07 |
| 申請(qǐng)公布號(hào) | CN108504651B | 申請(qǐng)公布日 | 2018-09-07 |
| 分類號(hào) | C12N15/10(2006.01)I;C40B50/06(2006.01)I | 分類 | - |
| 發(fā)明人 | 陳建國(guó);陳川;張靜;王瑢;楊傳春;張文勇 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 | 深圳市樂(lè)土精準(zhǔn)醫(yī)療科技有限公司 |
| 代理機(jī)構(gòu) | 深圳鼎合誠(chéng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 | 代理人 | 孫銀行;彭家恩 |
| 地址 | 518000廣東省深圳市大鵬新區(qū)葵涌街道生命科學(xué)產(chǎn)業(yè)園A11棟201 | ||
| 法律狀態(tài) | - | ||
摘要
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)了一種基于高通量測(cè)序的PCR產(chǎn)物大樣本量混合建庫(kù)的文庫(kù)構(gòu)建方法和試劑。方法包括：將來(lái)源于不同樣本DNA的多個(gè)PCR產(chǎn)物中的每一個(gè)，分別與帶有標(biāo)簽序列的隨機(jī)引物進(jìn)行退火，并在恒溫?cái)U(kuò)增酶的作用下進(jìn)行恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)；將不同樣本來(lái)源的恒溫?cái)U(kuò)增產(chǎn)物混合，并對(duì)混合產(chǎn)物進(jìn)行片段選擇；對(duì)片段選擇的產(chǎn)物進(jìn)行5’磷酸化平末端修復(fù)和3’末端加A反應(yīng)；與接頭序列連接，以得到能夠區(qū)分文庫(kù)信息的連接產(chǎn)物；對(duì)連接產(chǎn)物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以得到適用于高通量測(cè)序的上機(jī)文庫(kù)。本發(fā)明不依賴于超聲打斷儀器；實(shí)現(xiàn)混合建庫(kù)，降低建庫(kù)成本及復(fù)雜度；減少數(shù)據(jù)浪費(fèi)，提高測(cè)序數(shù)據(jù)的堿基隨機(jī)性、覆蓋深度均一性，從而降低單個(gè)樣本的測(cè)序成本。?? |
