構建細胞全轉錄本擴增產(chǎn)物的方法及其應用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201711475632.3 申請日 -
公開（公告）號 CN109988825A 公開（公告）日 2019-07-09
申請公布號 CN109988825A 申請公布日 2019-07-09
分類號 C12Q1/6851（2018.01）I; G01N33/574（2006.01）I; G01N33/569（2006.01）I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 郭琦; 王秀莉; 董超; 李長平; 盧孟孟; 宋廷瑞 申請（專利權）人 杭州蓮和醫(yī)學檢驗所有限公司
代理機構 北京清亦華知識產(chǎn)權代理事務所（普通合伙） 代理人 杭州蓮和醫(yī)學檢驗所有限公司
地址 310000 浙江省杭州市濱江區(qū)長河街道濱安路688號5幢五層501室
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提出了一種構建細胞全轉錄本擴增產(chǎn)物的方法。該方法包括：將細胞樣品進行磁珠捕獲處理，以便獲得待處理細胞；以及將所述待處理細胞進行單細胞全轉錄本擴增，以便獲得所述待處理細胞的全轉錄本擴增產(chǎn)物，其中，進行單細胞全轉錄本擴增之前，進一步包括將所述待處理細胞進行裂解處理，所述裂解處理是通過向所述待處理細胞中加入PBS和裂解液進行的，基于1～100個待處理細胞，所述PBS的用量為7微升，所述裂解液的用量為4微升，所述裂解液包括100mM Tris?HCl、500mM KCl、25mM MgCl2、10％NP40、0.1M DTT、RNA酶抑制劑(40U/μl)、0.5μM UP1引物、2.5mM dNTP以及無核酸酶水。該方法將磁珠捕獲技術與單細胞全轉錄本擴增技術巧妙相結合，嚴格控制待處理細胞與裂解液和PBS的加入量，可穩(wěn)定獲得微量細胞(如循環(huán)腫瘤細胞)全轉錄本擴增產(chǎn)物。