一種用于外源基因定點(diǎn)插入的基因編輯系統(tǒng)和方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202010875345.7 申請日 -
公開（公告）號 CN114107291A 公開（公告）日 2022-03-01
申請公布號 CN114107291A 申請公布日 2022-03-01
分類號 C12N15/113（2010.01）I;C12N9/22（2006.01）I;C12N15/90（2006.01）I;C12N5/10（2006.01）I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 栗鳳鵬;曹青;李華順 申請（專利權(quán)）人 阿思科力（蘇州）生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 蘇州三英知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 朱如松
地址 215000江蘇省蘇州市工業(yè)園區(qū)星湖街218號A2樓427單元
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明實(shí)施例公開了一種用于外源基因定點(diǎn)插入的基因編輯系統(tǒng)和方法，基因編輯系統(tǒng)，包括Cas9、sgRNA和ssDNA，所述Cas9和sgRNA構(gòu)成RNP復(fù)合物，所述sgRNA為外源基因的插入位點(diǎn)，所述ssDNA為外源基因的插入模板。本發(fā)明主要利用基因編輯技術(shù)，通過利用外源基因的模板?ssDNA作為修復(fù)模板，在sgRNA的配合下，成功在AAVS1位點(diǎn)實(shí)現(xiàn)1.6kb（CMV?EGFP?SV40 PolyA）的定點(diǎn)敲入；AAVS1敲入外源基因片段具有穩(wěn)定表達(dá)、不影響其他基因轉(zhuǎn)錄的優(yōu)點(diǎn)；并且為NK細(xì)胞中大片段精確敲入及NK細(xì)胞改造，如CAR?NK細(xì)胞的構(gòu)建提供了一種非病毒非質(zhì)粒的全新方法。