在食氣梭菌基因組上快速整合大片段DNA的方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201811174829.8 申請日 -
公開（公告）號(hào) CN111019873A 公開（公告）日 2020-04-17
申請公布號(hào) CN111019873A 申請公布日 2020-04-17
分類號(hào) C12N1/21;C12N15/113;C12N15/90;C12R1/145 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 黃鶴;柴常升;姜衛(wèi)紅;顧陽 申請（專利權(quán)）人 安徽吐露港生物科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 安徽吐露港生物科技有限公司
地址 239000 安徽省滁州市世紀(jì)大道801號(hào)（邵陽工業(yè)園）8二層?xùn)|北側(cè)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明提供了一種在食氣梭菌基因組上快速整合大片段DNA的方法。具體地，本發(fā)明包括步驟：(i)提供一待整合的宿主細(xì)胞，所述的宿主細(xì)胞的基因組中在待整合的位點(diǎn)處含有外源的attB序列；(ii)將含外源基因的整合構(gòu)建物引入所述宿主細(xì)胞，從而在所述宿主細(xì)胞的基因組的待整合位點(diǎn)進(jìn)行定位重組，從而獲得經(jīng)整合處理的宿主細(xì)胞；其中，所述的整合構(gòu)建物為環(huán)狀結(jié)構(gòu)，并且包括：ФCD27整合酶的表達(dá)盒、ФC31整合酶的表達(dá)盒、外源基因的表達(dá)盒、ФCD27的attP序列和ФC31的attP序列，其中，ФCD27的attP序列和ФC31的attP序列分別位于外源基因的兩側(cè)。本發(fā)明方法可以高效、穩(wěn)定地將大片段DNA整合入桿菌的基因組上。