一種基于家蠶-桿狀病毒系統(tǒng)制備人髓過(guò)氧化物酶的方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201510553322.3 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN105112382B 公開（公告）日 2018-10-26
申請(qǐng)公布號(hào) CN105112382B 申請(qǐng)公布日 2018-10-26
分類號(hào) C12N9/08;C12N15/866 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 陳俏梅;周亞竟;孫祥明;張茜;張倩;陳焰;陳慧卿;陳克平;傅海龍;王紅勛 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 中山瑞福醫(yī)療器械科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) - 代理人 -
地址 212013 江蘇省鎮(zhèn)江市京口區(qū)學(xué)府路301號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種基于家蠶?桿狀病毒系統(tǒng)制備人髓過(guò)氧化物酶的方法，涉及基因工程和生物技術(shù)領(lǐng)域。將完整的人髓過(guò)氧化物酶MPO的cDNA克隆到自身含6個(gè)組氨酸的供體質(zhì)粒上，獲得含人MPO基因的重組供體質(zhì)粒；在大腸桿菌BmDH10Bac中和家蠶桿狀病毒基因組桿粒于轉(zhuǎn)座子上發(fā)生轉(zhuǎn)座，通過(guò)藍(lán)、白斑篩選出帶有目的基因的克隆，隨后在家蠶細(xì)胞中制備含人MPO基因的重組病毒；用獲得的含目的基因的重組病毒感染宿主昆蟲家蠶，同時(shí)給家蠶添加一定量的血紅素前體；收集家蠶幼蟲的體液，經(jīng)超聲波裂解，下進(jìn)行高速離心，收集的上清進(jìn)行分離純化，最終獲得目的產(chǎn)物。本發(fā)明利用家蠶作為生物反應(yīng)器，大規(guī)模、低成本、高效率地制備重組人MPO的方法。