利用RNAi技術(shù)和RNAi rescue原理制備突變型克隆載體的方法及應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN200910146262.8 申請日 -
公開（公告）號 CN101880684A 公開（公告）日 2010-11-10
申請公布號 CN101880684A 申請公布日 2010-11-10
分類號 C12N15/66(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 曹躍瓊 申請（專利權(quán)）人 蘇州吉凱基因科技有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海光華專利事務(wù)所 代理人 許亦琳;余明偉
地址 215316 江蘇省昆山市玉山鎮(zhèn)北門路757號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用RNAi技術(shù)和RNAi?rescue原理制備突變型克隆載體的方法及應(yīng)用，包括如下步驟：目的基因RNAi有效靶點(diǎn)設(shè)計和載體構(gòu)建；RNAitarget?mRNA區(qū)第三個堿基同義突變；多重PCR獲得含同義突變的目的基因全長mRNA；突變型克隆載體構(gòu)建；突變型克隆載體構(gòu)建成功證明；回復(fù)功能實(shí)驗(yàn)。本發(fā)明的方法通過RNAi沉默基因觀察功能變化情況，回復(fù)突變的載體與RNAi同時感染或轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞，一方面沉默內(nèi)源目的基因，但不沉默外源目的基因，通過外源突變型載體表達(dá)與內(nèi)源相同功能的蛋白，經(jīng)過這樣組合處理細(xì)胞功能不發(fā)生改變；或者將突變型載體導(dǎo)入RNAi沉默后，功能得到回復(fù)，證明功能表型是由此基因引起的。本發(fā)明為基因功能研究提供了一種新的模型和方法。