一種莽草酸生產(chǎn)用基因工程菌株的構(gòu)建方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201110248675.4 申請日 -
公開（公告）號 CN102304539A 公開（公告）日 2012-01-04
申請公布號 CN102304539A 申請公布日 2012-01-04
分類號 C12N15/70(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 王春陽;張?zhí)N才;武廣君;孟軍虎;任存邦;董建輝;石玲瓏;李曉霞;喬娟平;葉曉沖;王娜 申請（專利權(quán)）人 河南孟成生物藥業(yè)股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所（普通合伙） 代理人 河南孟成生物藥業(yè)股份有限公司
地址 472500 河南省三門峽市靈寶市弘農(nóng)路中段許家場1號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種莽草酸生產(chǎn)用基因工程菌株的構(gòu)建方法，其包括以下步驟：①構(gòu)建aroA基因敲除的大腸桿菌菌株；②構(gòu)建含有莽草酸代謝途徑中的關(guān)鍵酶基因aroGFBR、aroE、aroB、aroD、tktA和ppsA的重組表達(dá)質(zhì)粒pAR63，且這些基因均處于色氨酸啟動子Ptrp的轉(zhuǎn)錄控制下；③將重組表達(dá)質(zhì)粒pAR63轉(zhuǎn)入已敲除aroA基因的大腸桿菌菌株，獲得表達(dá)莽草酸的生產(chǎn)菌株。本發(fā)明方法通過敲除aroA單基因?qū)崿F(xiàn)中斷莽草酸代謝的目的，敲除基因少，操作難度小，基因的表達(dá)處于自動開關(guān)狀態(tài)，在中后期自動啟動，無需誘導(dǎo)物的誘導(dǎo)，減少了向培養(yǎng)基中添加有毒物質(zhì)的可能性，莽草酸產(chǎn)量高。