一種莽草酸生產(chǎn)用基因工程菌株的構(gòu)建方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201110248675.4 申請(qǐng)日 -
公開(kāi)（公告）號(hào) CN102304539B 公開(kāi)（公告）日 2013-05-01
申請(qǐng)公布號(hào) CN102304539B 申請(qǐng)公布日 2013-05-01
分類(lèi)號(hào) C12N15/70(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N 分類(lèi) 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 王春陽(yáng);張?zhí)N才;武廣君;孟軍虎;任存邦;董建輝;石玲瓏;李曉霞;喬娟平;葉曉沖;王娜 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人 河南孟成生物藥業(yè)股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 鄭州聯(lián)科專(zhuān)利事務(wù)所（普通合伙） 代理人 時(shí)立新
地址 472500 河南省三門(mén)峽市靈寶市弘農(nóng)路中段許家場(chǎng)1號(hào)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種莽草酸生產(chǎn)用基因工程菌株的構(gòu)建方法，其包括以下步驟：①構(gòu)建aroA基因敲除的大腸桿菌菌株；②構(gòu)建含有莽草酸代謝途徑中的關(guān)鍵酶基因aroGFBR、aroE、aroB、aroD、tktA和ppsA的重組表達(dá)質(zhì)粒pAR63，且這些基因均處于色氨酸啟動(dòng)子Ptrp的轉(zhuǎn)錄控制下；③將重組表達(dá)質(zhì)粒pAR63轉(zhuǎn)入已敲除aroA基因的大腸桿菌菌株，獲得表達(dá)莽草酸的生產(chǎn)菌株。本發(fā)明方法通過(guò)敲除aroA單基因?qū)崿F(xiàn)中斷莽草酸代謝的目的，敲除基因少，操作難度小，基因的表達(dá)處于自動(dòng)開(kāi)關(guān)狀態(tài)，在中后期自動(dòng)啟動(dòng)，無(wú)需誘導(dǎo)物的誘導(dǎo)，減少了向培養(yǎng)基中添加有毒物質(zhì)的可能性，莽草酸產(chǎn)量高。