一種細(xì)胞水平篩選金屬基質(zhì)蛋白酶抑制劑的方法

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN201210103880.6 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN102618620A 公開（公告）日 2012-08-01
申請(qǐng)公布號(hào) CN102618620A 申請(qǐng)公布日 2012-08-01
分類號(hào) C12Q1/02(2006.01)I;G01N21/64(2006.01)I 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 魯曉鋒;史小娟 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 上海健耕醫(yī)藥科技股份有限公司
代理機(jī)構(gòu) 上海泰能知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 代理人 上海健耕醫(yī)藥科技有限公司;上海云澤生物科技有限公司;上海健耕醫(yī)藥科技股份有限公司
地址 201112 上海市閔行區(qū)聯(lián)航路1188號(hào)浦江智谷10號(hào)樓3樓C座
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種細(xì)胞水平篩選金屬基質(zhì)蛋白酶抑制劑的方法，包括：(1)設(shè)計(jì)引物，PCR擴(kuò)增金屬基質(zhì)蛋白酶的全長(zhǎng)cDNA；(2)構(gòu)建以Retro-X?Tet-Off為載體的表達(dá)體系；(3)將上述構(gòu)建完成的載體對(duì)細(xì)胞系進(jìn)行轉(zhuǎn)染，并篩選陽(yáng)性克隆，當(dāng)細(xì)胞鋪滿皿底后，將培養(yǎng)基換為不含DOX的培養(yǎng)基，誘導(dǎo)MMPs的表達(dá)；(4)篩選出金屬基質(zhì)蛋白酶抑制劑。本發(fā)明建立了一個(gè)基于Tet-off表達(dá)系統(tǒng)的，能最大程度模擬MMP的作用環(huán)境的方法，用于MMP抑制劑的篩選，相對(duì)一般金屬基質(zhì)蛋白酶抑制劑體外篩選更準(zhǔn)確。