hTERT基因作為內(nèi)參基因在利用qPCR直接檢測血漿中cfDNA含量中的用途

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201711334588.4 申請日 -
公開（公告）號 CN107974505A 公開（公告）日 2018-05-01
申請公布號 CN107974505A 申請公布日 2018-05-01
分類號 C12Q1/6886;C12Q1/6851;C12Q1/6848 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 李同恩;羅璽;師鴻翔;鄭康;朱明宇;周茜;劉春柳;趙圓圓;張文會;王紅飛;劉媛;張振宇;趙鵬;王秉孝;朱兵 申請（專利權(quán)）人 中源協(xié)和基因科技有限公司
代理機構(gòu) 天津才智專利商標代理有限公司 代理人 中源協(xié)和基因科技有限公司;北京中源維康基因科技有限公司
地址 300304 天津市東麗區(qū)空港經(jīng)濟區(qū)東九道45號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種hTERT基因作為內(nèi)參基因在利用qPCR直接檢測血漿中cfDNA含量中的用途，本發(fā)明通過檢測DNA中看家基因或穩(wěn)定出現(xiàn)的某些非編碼重復(fù)序列，達到cfDNA定量的目的。進行qPCR之前，血漿用備好的緩沖液和蛋白酶K處理，以去掉蛋白質(zhì)，在反應(yīng)混合物中加入一種用于困難模板擴增的特殊聚合酶(velocity polymerase)，該酶每10S可延伸l kb堿基，血漿1：40稀釋后，不需其他處理，直接加入反應(yīng)體系進行qPCR測定血漿cfDNA濃度，通過擴增兩種長度的靶序列對cfDNA定量。本發(fā)明可以有效的去除掉由于PCR及測序引入的錯誤突變，降低檢測的背景噪音。對于0.1％的檢測限，其靈敏度可以達到90％以上，特異度高達99.9％。