檢測(cè)CAR-T細(xì)胞CAR陽(yáng)性表達(dá)率的熒光融合蛋白及其應(yīng)用

基本信息

申請(qǐng)?zhí)?/td> CN202111464981.1 申請(qǐng)日 -
公開（公告）號(hào) CN114380904A 公開（公告）日 2022-04-22
申請(qǐng)公布號(hào) CN114380904A 申請(qǐng)公布日 2022-04-22
分類號(hào) C07K14/705（2006.01）I;C07K14/435（2006.01）I;C07K19/00（2006.01）I;C12N15/62（2006.01）I;C12N15/867（2006.01）I;C12N5/10（2006.01）I;G01N33/68（2006.01）I;G01N15/14（2006.01）I 分類 有機(jī)化學(xué)〔2〕;
發(fā)明人 趙禮軍;毛文超;李靜靜 申請(qǐng)（專利權(quán)）人 河南省華隆生物技術(shù)有限公司
代理機(jī)構(gòu) 洛陽(yáng)公信聯(lián)創(chuàng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 代理人 李真真
地址 453000河南省新鄉(xiāng)市新飛大道1789號(hào)高新區(qū)火炬園
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及檢測(cè)CAR?T細(xì)胞CAR陽(yáng)性表達(dá)率的熒光融合蛋白及其應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，所述熒光融合蛋白是將CD19的部分片段與GFP進(jìn)行融合，經(jīng)過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染于SupB?1細(xì)胞中，使其再在表達(dá)WT型的CD19時(shí)，形成雜交型的CD19?GFP蛋白，這種蛋白由于GFP的存在不能與CD81型成復(fù)合物，從而存在游離型的CD19?GFP，用這種Sup?B?1細(xì)胞培養(yǎng)上清液與生產(chǎn)的CAR?T細(xì)胞外的anti?CD19?scFv區(qū)進(jìn)行結(jié)合，利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行488通道檢測(cè)，從而能夠?qū)AR?T細(xì)胞CAR陽(yáng)性率進(jìn)行檢測(cè)。與現(xiàn)有常用的PCR、WB、抗抗體/或熒光素酶標(biāo)CD19?流式技術(shù)，本技術(shù)無(wú)需對(duì)檢測(cè)蛋白進(jìn)行純化，效率更高，成本更低。