一種2?酮基葡萄糖酸激酶的優(yōu)化基因、表達載體及應(yīng)用

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201710979079.0 申請日 -
公開（公告）號 CN107488671A 公開（公告）日 2017-12-19
申請公布號 CN107488671A 申請公布日 2017-12-19
分類號 C12N15/54(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I;C12N9/12(2006.01)I;C12R1/84(2006.01)N 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 孫文敬;何小用;周強;崔鳳杰;余泗蓮;錢靜亞 申請（專利權(quán)）人 江西省德興市百勤異VC鈉有限公司
代理機構(gòu) 北京高沃律師事務(wù)所 代理人 江蘇大學(xué)
地址 212000 江蘇省鎮(zhèn)江市學(xué)府路301號
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明公開了一種2?酮基葡萄糖酸激酶的優(yōu)化基因、表達載體及應(yīng)用，屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明2?酮基葡萄糖酸激酶的優(yōu)化基因如SEQ?ID?NO.3所示。以穿梭表達質(zhì)粒pPICZαB為載體，采用酶切和無縫克隆技術(shù)對其進行無分泌表達功能的定向化改造，并將經(jīng)密碼子偏向性優(yōu)化的2?酮基葡萄糖酸激酶基因(kguK)插入到載體啟動子AOX1的下游。以畢赤酵母(Pichia?pastoris)X?33為宿主菌，通過電轉(zhuǎn)化和博來霉素抗性平板篩選獲取具有高拷貝kguK基因且穩(wěn)定表達具有生物活性的KguK的重組菌株P(guān).pastoris?X/pPICZ(Δα)B?kguK。經(jīng)細胞破碎、親和層析、透析和超濾濃縮等步驟，可以獲得比活力達700U/g以上的KguK。