一種乳酸脫氫酶突變體基因LbLDH1及其在大腸桿菌中高效表達(dá)的發(fā)酵方法

基本信息

申請?zhí)?/td> CN201811069893.X 申請日 -
公開（公告）號 CN109280651A 公開（公告）日 2019-01-29
申請公布號 CN109280651A 申請公布日 2019-01-29
分類號 C12N9/04;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 分類 生物化學(xué)；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學(xué)；酶學(xué)；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 魏琪;邱鵬;蔣飛;張騫;王洪;羅紅 申請（專利權(quán)）人 四川自豪時代藥業(yè)有限公司
代理機構(gòu) 成都高遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所（普通合伙） 代理人 四川自豪時代藥業(yè)有限公司
地址 620010 四川省眉山市東坡區(qū)經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)新區(qū)
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 本發(fā)明涉及一種乳酸脫氫酶突變體基因LbLDH1及其在大腸桿菌中高效表達(dá)的發(fā)酵方法。該發(fā)明依賴于遺傳資源Lactobacillus bulgaricus的乳酸脫氫酶基因，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行點突變并對基因序列進(jìn)行密碼子優(yōu)化后，連接到表達(dá)載體上，構(gòu)建重組質(zhì)粒并導(dǎo)入大腸桿菌中，重組乳酸脫氫酶突變體在大腸桿菌中獲得了可溶性高表達(dá)，離心收集的菌體經(jīng)高壓均質(zhì)機破菌后，粗酶液可在低溫下存放5天，活性無明顯衰減。通過本方法制備的重組乳酸脫氫酶突變體與未進(jìn)行突變及序列優(yōu)化的重組乳酸脫氫酶相比，表達(dá)量提高了五倍以上，且在高pH值下的活性損失更小，有更廣的pH值適用范圍。本發(fā)明在乳酸發(fā)酵制備及NAD/NADH循環(huán)中有廣闊的應(yīng)用前景。