一種基于WST-8檢測NAD

基本信息

申請?zhí)?/td> CN202010520532.3 申請日 -
公開（公告）號 CN113774110A 公開（公告）日 2021-12-10
申請公布號 CN113774110A 申請公布日 2021-12-10
分類號 C12Q1/32（2006.01）I;C12Q1/00（2006.01）I 分類 生物化學；啤酒；烈性酒；果汁酒；醋；微生物學；酶學；突變或遺傳工程;
發(fā)明人 白玉杰;張曉娟;孫海星;王建輝;林思妮;張艷;吳東穎;董紅宇 申請（專利權(quán)）人 山東荊衛(wèi)生物科技有限公司
代理機構(gòu) - 代理人 -
地址 261000山東省濰坊市峽山區(qū)怡峽街197號生命科學園D棟
法律狀態(tài) -

摘要

摘要 一種基于WST?8檢測NAD濃度的酶循環(huán)方法，其特征在于：首先將樣品進行酸化、中和、離心處理得到NAD提取液，再進行酶循環(huán)反應(yīng)；所述酶循環(huán)反應(yīng)為乙醇在乙醇脫氫酶（ADH）的作用下氧化生成乙醛，同時NAD被還原為NADH，生成的NADH在電子耦合試劑1?mPMS的作用下將WST?8還原生成橙黃色的甲臜，它在450nm左右有最大吸收峰。根據(jù)反應(yīng)體系中生成甲臜的速率與NAD量之間的線性關(guān)系，實現(xiàn)樣品NAD濃度的快速、準確定量。所述方法適用多種生物樣本，包括血清、血漿、尿液、組織液、細胞培養(yǎng)基、細胞、動物組織塊等。所述方法測定樣品中NAD濃度線性良好，且靈敏度高、準確度高、重復(fù)性好、檢測成本低，有較高的科研與臨床應(yīng)用價值。